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人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4使用说明书

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所  在  地上海市

更新时间:2017-01-20 13:18:52浏览次数:295次

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产品简介

人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4使用说明书细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。

详细介绍

【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗

细胞名称  人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4使用说明书
形态特性   淋巴母细胞样;圆形
生长特性  悬浮生长
特征特性   MOLT-4与MOLT-3来源于一名19岁的男性急性淋巴细胞性白血病的复发患者,该患者前期接受过多种药物联合*。MOLT-4细胞系为T淋巴细胞起源,p53基因的第248位密码子有一个G→A突变,不表达p53,不表达免疫球蛋白或EB病毒;可产生高水平的末端脱氧核糖转移酶;表达CD1 (49%), CD2 (35%), CD3 A (26%) B (33%) C (34%), CD4 (55%), CD5 (72%), CD6 (22%), CD7 (77%)。 
培养条件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
传代方法   维持细胞浓度在4×105/ml~2×106/ml;根据细胞浓度每2~3天补液1次。
传代情况  C5
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  培养法(-)
STR   Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11,12,13;D13S317:12,13;D16S539:11,14;D18S51:13,17;D19S433:14,15;D21S11:28,29,30,31;D2S1338:23,24;D3S1358:14,16;D5S818:12;D7S820:8,10,11;D8S1179:9,14;FGA:22,23,25;TH01:6,8;TPOX:8;vWA:17,18
同工酶  
染色体   84~89
使用权限  A类

产品名称人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4使用说明书
货期3-5天
发货地上海

复苏操作要点: 
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
NES/KLK10    英文名称:    上皮细胞特异蛋白1抗体    ?0.1ml
phospho-KCNC1(Ser503)    英文名称:    磷酸化离子通道蛋白Kv3.1抗体    ?0.1ml
KAT4    英文名称:    细胞周期基因1蛋白抗体    ?0.1ml
KLF5    英文名称:    驱动蛋白KIF5B抗体    ?0.1ml
KLHL13    英文名称:    kelch样蛋白13抗体    ?0.2ml
KCNN3    英文名称:    钙激活钾通道蛋白3抗体    ?0.1ml
KIBRA    英文名称:    肾脏和脑蛋白抗体    ?0.2ml
KIF2B    英文名称:    有丝分裂驱动蛋白样2B抗体    ?0.2ml
KLHL9    英文名称:    kelch样蛋白9抗体    ?0.2ml
KIF15    英文名称:    驱动蛋白家族成员15抗体    ?0.2ml
KNTC1    英文名称:    着丝点关联蛋白1抗体    ?0.2ml
KLHDC5    英文名称:    kelch样蛋白5抗体    ?0.2mlIL-6 (Rabbit Interleukin 6) ELISA Kit  兔白介素6    Multi-class antibodies    规格:     96T
Alpha2-AP (Rabbit Alpha2-Antiplasmin) ELISA Kit  兔子α2抗纤溶酶    Multi-class antibodies    规格:     96T
SAA (Rabbit Serum amyloid A) ELISA Kit  兔血清淀粉样蛋白A    Multi-class antibodies    规格:     96T
Hpt/HP (Rabbit Haptoglobin) ELISA Kit  兔结合珠蛋白/触珠蛋白    Multi-class antibodies    规格:     96T
Plg (Rabbit Plasminogen) ELISA Kit  兔子纤溶酶原    Multi-class antibodies    规格:     96T
BMPs (Rabbit bone morphogenetic proteins) ELISA Kit  兔骨形成蛋白    Multi-class antibodies    规格:     96T
OPG (Rabbit Osteoprotegerin) ELISA Kit  兔骨保护素    Multi-class antibodies    规格:     96T
Amylin (Rabbit Amylin ) ELISA Kit  兔胰淀素    Multi-class antibodies    规格:     96T
cTn- I (Rabbit cardiac troponin I ) ELISA Kit  兔心肌肌钙蛋白Ⅰ    Multi-class antibodies    规格:     96T
RANKL (Rabbit receptor activator of nuclear factor kappa B ligand) ELISA Kit  兔核因子κB受体活化因子配基    Multi-class antibodies    规格:     96T

 

 

 


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