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人胚肾上皮细胞;GC-293T培养

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所  在  地上海市

更新时间:2017-01-20 11:01:05浏览次数:689次

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产品简介

人胚肾上皮细胞;GC-293T培养一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。

详细介绍

【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗

细胞名称  人胚肾上皮细胞;GC-293T培养
形态特性   上皮样
生长特性  贴壁生长
特征特性   该细胞属保藏,其特征特性尚未公开。 
培养条件    10%FBS
传代方法   无
传代情况  1:3传代,3-4天传1次
冻存条件   C5
支原体检测  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
STR   阴性
同工酶  
染色体   未做

产品名称人胚肾上皮细胞;GC-293T培养
货期3-5天
发货地上海

复苏操作要点: 
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
TAFI ELISA Kit  大鼠纤溶抑制因子/*激活的纤溶抑制物    Multi-class antibodies    规格:     48T
GP- II b III a/CD41+CD61 ELISA Kit  大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa    Multi-class antibodies    规格:     48T
TSP-1 ELISA Kit  大鼠血小板反应蛋白/*敏感蛋白1    Multi-class antibodies    规格:     48T
ON ELISA Kit  大鼠骨粘连蛋白    Multi-class antibodies    规格:     48T
FFA ELISA Kit  大鼠游离脂肪酸    Multi-class antibodies    规格:     48T
FA ELISA Kit  大鼠*    Multi-class antibodies    规格:     48T
histon-H2b ELISA Kit  大鼠组蛋白H2b    Multi-class antibodies    规格:     48T
NT-proBNP ELISA KIT  大鼠N端前脑钠素    Multi-class antibodies    规格:     48T
GR ELISA Kit  大鼠糖皮质类固醇受体    Multi-class antibodies    规格:     48T
LHRH ELISA Kit  大鼠黄体生成素释放激素    Multi-class antibodies    规格:     48T
8-iso-PG ELISA Kit  大鼠8异前列腺素    Multi-class antibodies    规格:     48T
IFI16/p16 ELISA Kit  大鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16    Multi-class antibodies    规格:     48T
SDF-1a/CXCL12 ELISA Kit   大鼠基质细胞衍生因子1a    Multi-class antibodies    规格:     48T
GMP-140 ELISA Kit   大鼠血浆α颗粒膜蛋白    Multi-class antibodies    规格:     48T
MPO ELISA Kit  大鼠髓过氧化物酶    Multi-class antibodies    规格:     48Tphospho-HMGCR(Ser872)    英文名称:    磷酸化三羟基*基*还原酶抗体    ?0.1ml
HSD3a    英文名称:    羟基类固醇脱氢酶3α抗体    ?0.2ml
HLX1    英文名称:    同源异型盒基因HLX1蛋白抗体    ?0.2ml
HMGCS1    英文名称:    三羟基*基*合成酶1    ?0.2ml
HSF1    英文名称:    热休克因子1抗体    ?0.1ml
phospho-HSF1(Ser326)    英文名称:    磷酸化热休克因子1抗体    ?0.1ml
Hsc70    英文名称:    热休克蛋白71抗体    ?0.1ml
hHBrk1    英文名称:    微丝相关蛋白hHBrk1抗体    ?0.1ml
HPCL2    英文名称:    植烷酰*羟化酶2抗体    ?0.2ml
H9N1 Neuraminidase    英文名称:    A型流感病毒H9N1神经氨酸酶型抗体    ?0.2ml
H9N1 Hemagglutinin    英文名称:    A型流感病毒H9N1血凝素型抗体    ?1ml
HPV33 E7    英文名称:    人类状瘤病毒33抗体    ?0.2ml
H1N1 Matrix Protein 1    英文名称:    A型病毒H1N1蛋白抗体    ?0.1ml

 

 

 


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