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人肾小管上皮细胞;HKC使用说明书

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更新时间:2017-01-19 16:17:13浏览次数:358次

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产品简介

人肾小管上皮细胞;HKC使用说明书,细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。

详细介绍

 

产品名称人肾小管上皮细胞;HKC使用说明书
货期3-5天
发货地上海

细胞名称  人肾小管上皮细胞;HKC使用说明书
形态特性   多角
生长特性  贴壁生长
特征特性   该细胞常用于肾小管上皮细胞代谢方面的研究。STR检测发现该细胞被人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2污染。 
培养条件   DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium)  5%FBS
传代方法   1:3传代;2~3天1次。
传代情况  C3
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  培养法(-)
STR   Amelogenin:X,Y;CSF1PO:13;D13S317:9;D16S539:11,12;D18S51:12;D19S433:15,15.2;D21S11:28,30;D2S1338:17,25;D3S1358:16,17;D5S818:12;D7S820:10,11;D8S1179:10,14;FGA:20,22;TH01:9;TPOX:8,9;vWA:17,18;
同工酶  
染色体   
使用权限  A类

复苏操作要点: 
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗
PS(Human phosphatidylserine) ELISA Kit  人磷脂酰*    Multi-class antibodies    规格:     48T
PC/CPG(Human choline phosphoglyceride) ELISA Kit  人*磷酸甘油酯    Multi-class antibodies    规格:     48T
TBA(Human Total bile acide) ELISA Kit  人总胆汁酸    Multi-class antibodies    规格:     48T
Apo C3(Human Apolipoprotein C3) ELISA Kit  人载脂蛋白C3    Multi-class antibodies    规格:     48T
CH(Human cholesterol) ELISA Kit  人血清总*    Multi-class antibodies    规格:     48T
MT2(Human Metallothionein 2) ELISA Kit  人金属硫蛋白2    Multi-class antibodies    规格:     48T
sLOX-1(Human Soluble Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1) ELISA Kit  人可溶凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1    Multi-class antibodies    规格:     48T
3-NT(Human 3-Nitrotyrosine) ELISA Kit  人3-硝基*    Multi-class antibodies    规格:     48T
GAG(Human glycosaminoglycan) ELISA Kit  人糖胺聚糖    Multi-class antibodies    规格:     48T
CysLTs(Human cysteinyl leukotrienes) ELISA Kit  人半胱氨酰白三烯    Multi-class antibodies    规格:     48T
CALU(Human calumenin) ELISA Kit  人钙腔蛋白    Multi-class antibodies    规格:     48TFGF4    英文名称:    纤维母细胞生长因子4抗体    ?0.1ml
FRA1    英文名称:    FRA-1蛋白抗体    ?0.1ml
FTSJ1    英文名称:    精神发育迟滞相关蛋白抗体    ?0.2ml
FAM62C    英文名称:    延伸突触蛋白3抗体    ?0.2ml
Fibrillin 2    英文名称:    原纤维蛋白2抗体    ?0.2ml
FLI1    英文名称:    尤文肉瘤FLI1蛋白抗体    ?0.2ml
FUT1    英文名称:    岩藻糖转移酶1抗体    ?0.2ml
FLIP delta + gamma    英文名称:    凋亡调节蛋白δ+γ抗体    ?0.2ml
FOXO1 + FOXO3 + FOXO4    英文名称:    叉头蛋白O1/O3/O4抗体    ?0.2ml
FAM82B    英文名称:    微管相关蛋白FAM82B抗体    ?0.2ml
Fibrinogen alpha chain    英文名称:    纤维蛋白原A链抗体    ?0.2ml
FAIM1    英文名称:    FAS凋亡抑制分子1抗体    ?0.2ml
FAIM2    英文名称:    FAS凋亡抑制分子2    ?0.1ml

 

 


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