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上海抚生实业有限公司
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阅读:300发布时间:2017-7-25
elisa酶联免疫试剂盒研究显示,转录激活蛋白结合靶基因前面的特定DNA序列,与RNA聚合酶形成魔术贴那样的相互作用,稳定RNA聚合酶与DNA的接触。转录激活蛋白与RNA聚合酶的互作可以分为两个部分,首先转录激活蛋白帮助RNA聚合酶结合DNA双螺旋,随后转录激活蛋白帮助RNA聚合酶解开DNA双螺旋,起始靶基因的转录。
对于生物学来说一个基本的概念就是如果某种生物开发出了一种武器,那么它也会同时准备好一种防御手段。事实证明。 。 。噬菌体已经进化出了关闭CRISPR系统的方式,就是这些抗CRISPR蛋白。”
在此基础上,为了深入探索AcrIIA4的作用机制,研究人员采用了多种方法,如冷冻电子显微镜和人体细胞培养等方法,发现这种抗CRISPR蛋白是通过竞争绑定到通常是用来结合DNA的Cas9酶上“凹陷袋”结构域来发挥作用的,这样能阻断Cas9酶与DNA的相互作用。
研究人员发现AcrIIA4会与“凹陷袋”内的酶结合,AcrIIA4与酶的结合可阻止Cas9酶附着于靶标DNA并对其进行切割。对人类细胞的研究揭示,如果这些细胞在基因编辑开始前就用这一蛋白抑制剂进行处理,那么CRIPSR-Cas复合物就可大体上被阻止对任何部位的DNA进行剪切。
结果还显示,大约一半的CRISPR-Cas9对DNA的击中目标的编辑(即该系统按照科学家所希望的方式对基因编辑进行正确的剪切)发生在这一系统进入后的6小时内。之前的研究显示CRISPR-Cas9可能在偏离靶标部位留置一段时间,但未对它们进行剪切。通过利用这一时间差,研究人员在人类白血病细胞内引进了一个被指示对2个基因(其中包括与镰状细胞病有关的基因)进行剪切的CRISPR-Cas9复合物,并接着在6小时后添加了AcrIIA4。结果显示,在恰当的时间添加AcrIIA4可防止在错误的位置剪切基因,同时CRISPR也仍有时间在正确的位置进行基因剪切。
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