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elisa试剂盒反应巢式PCR具体步骤

阅读:412发布时间:2017-2-20

elisa酶联免疫试剂盒巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR),使用两对(而非一对)PCR引物扩增完整的片段。实验步骤
*步:目标的DNA模板蓝色的*对引物结合。*对引物也可能结合到其他具有相似结合位点的片段上并扩增多种产物。但只有一种产物是目的片断(图中未显示可能的多种产物)。
第二步:使用图中红色标记的第二套引物对*轮PCR扩增的产物进行第二轮PCR扩增。
由于第二套引物位于*轮PCR产物内部,而非目的片断包含两套引物结合位点的可能性极小,因此第二套引物不可能扩增非目的片断。这种巢式PCR扩增确保第二轮PCR产物几乎或者*没有引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。

elisa酶联免疫试剂盒每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
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elisa酶联免疫试剂盒

 

 


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