Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

Rosetta-gami 2(DE3) ；Rosetta-gami B(DE3)；BL21(DE3)；Tuner^TM；Origami；Rosetta；

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菌株描述

Rosetta-gami 2菌株融合了Rosetta 2和Origami 2两大菌株的关键特征，不仅增强细胞质中二硫键的形成，而且提高含大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达。

→ pRARE2赋予其Rosetta 2菌的特征，补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子（AUA， AGG， AGA，CUA，CCC，GGA和CGG）对应的tRNA，位于一共存的氯霉su抗性质粒上，由天然启动子启动tRNA，提高了外源基因的表达水平。

→ gor522::Tn10 trxB赋予其Origami 2菌的特征，含突变的硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxin Reductase, trxB）和谷胱甘太还原酶（glutathione reductase, gor）基因，明显改善细胞质内二硫键的形成，增强蛋白的可溶性。

DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体（携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因）。这种菌株适用于目的基因克隆在pET载体上的蛋白生产，由IPTG诱导表达。

Rosetta-gami 2(DE3)菌株具有氯霉su，链霉su和四环素抗性。兼容于具氨苄或卡那霉su抗性的载体。

Rosetta-gami 2(DE3)菌株基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pRARE2 (Cam^R, Str^R, Tet^R)

产品描述

本品是大肠杆菌Rosetta-gami 2(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞10⁸ cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上融化感受态细胞，插入冰内8min内加入目的DNA，不可在冰上放置过长，否则转化效率会降低。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最小

6） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

7） 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间、温度、IPTG浓度（0.1~2mM）都需进行优化。

8） Rosetta-gami 2(DE3)菌株携带pRARE2质粒，除复苏培养基无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉su，以防质粒丢失。

9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含34 µg/ml氯霉su和所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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大肠杆菌化学感受态细胞表达分析

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