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上海瑞齐生命科学有限公司
阅读:505发布时间:2016-7-19
分子生物学服务
一、DNA抽提及纯化
根据客户要求,利用试剂盒,对动物(组织、细胞、血液等)、植物(各种组织)、微生物、病毒等进行DNA抽提及纯化。
提供结果:DNA、电泳图、OD值及定量结果(浓度及体积)。
二、RNA抽提及纯化
根据客户要求,利用试剂盒或自产试剂盒(主要针对特殊组织,如含次生代谢产物丰富的植物组织等),对动物(组织、细胞、血液等)、植物(各种组织)、微生物、病毒等进行RNA抽提及纯化。
提供结果:RNA、电泳图、OD值及定量结果(浓度及体积)。
三、mRNA分离及纯化
根据客户要求,利用Qiagen公司分离纯化试剂盒或国产分离纯化试剂盒,对总RNA进行mRNA的分离及纯化,以获得高质量的mRNA用于后续的建库等工作。
提供结果:mRNA、电泳图及定量结果(浓度及体积)。
四、PCR及纯化
根据客户要求,利用客户提供的样品及引物,进行批量PCR并进行产物纯化,包括前期的转化、铺板、挑菌、摇菌等工作,可提供全程服务。纯化建议采用millipore公司纯化板。
提供结果:PCR产物、电泳图及定量结果(浓度及体积)。
五、质粒抽提
根据客户要求,利用进口或国产试剂盒,对客户提供样品进行质粒小抽或大抽。为客户提供内毒素含量达到科研级和医药级的质粒DNA。
提供结果:质粒、实验报告(包括质粒电泳照片、鉴定结果及OD值测定结果)、1.7≤OD260/OD280≤2.0的质粒。
六、RT-PCR检测
RT-PCR是以RNA为起始材料经逆转录反应产生cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增以获取目的基因,用于检测细胞或组织中基因表达变化。
实验流程:包括RNA制备、RT反应、PCR反应等。
引物要求:由服务方设计并合成。如果客户提供,需提供引物序列;引物若为干粉,请提供引物的准确量;若为稀释液,请提供引物的zui终浓度(每个反应所需的引物满足以下要求:浓度≥10pm/μl,体积≥10μl)。
结果报告内容:电泳图谱及相关说明;实验流程。
七、载体构建
载体构建是将目的基因与载体连接并转化得到重组质粒的过程,客户需提供来源可靠的组织,细胞或血液以便用于目的基因的扩增。
1、原核表达载体的构建、诱导表达和蛋白纯化
实验过程:RNA抽提、RT-PCR、连接、转化、挑选阳性克隆、测序、诱导表达、蛋白纯化
提供结果:
(1)、提供测序报告*1份
(2)、PCR扩增电泳图片*1份
(3)、重组质粒菌种或者质粒(30ul)*1份
(4)、纯化后蛋白
(5)、实验报告*1份
2、真核表达载体的构建
实验过程:RNA抽提、RT-PCR、连接、转化、挑选阳性克隆、测序
提供结果:
(1)、提供测序报告*1份
(2)、PCR扩增电泳图片*1份
(3)、重组质粒菌种或者质粒(30ul)*1份
(4)、实验报告*1份
3、腺病毒载体构建及病毒包装服务
* 目的基因克隆载体的构建
实验过程:RNA抽提、RT-PCR、连接、转化、挑选阳性克隆、测序
提供结果:
(1)、提供测序报告*1份
(2)、PCR扩增电泳图片*1份
(3)、重组质粒菌种或者质粒(30ul)*1份
(4)、实验报告*1份
* 目的基因表达载体构建
实验过程:酶切,连接,转化,挑选阳性克隆,PCR鉴定,酶切鉴定
提供结果:
(1)、PCR鉴定图片*1份
(2)、酶切鉴定图片*1份
(3)、实验报告*1份
* 包装腺病毒
实验过程:酶切,共转染细胞,细胞培养,鉴定,纯化,测定浓度
提供结果:
(1)、实验报告*1份
(2)、转染后图片*1份
(3)、包装好的病毒*1份(滴度>5*107)
4、慢病毒载体构建及病毒包装服务
* 目的基因克隆载体的构建
实验过程:RNA抽提、RT-PCR、连接、转化、挑选阳性克隆、测序
提供结果:
(1)、提供测序报告*1份
(2)、PCR扩增电泳图片*1份
(3)、重组质粒菌种或者质粒(30ul)*1份
(4)、实验报告*1份
* 目的基因表达载体构建
实验过程:酶切,连接,转化,挑选阳性克隆,PCR鉴定,酶切鉴定
提供结果:
(1)、PCR鉴定图片*1份
(2)、酶切鉴定图片*1份
(3)、实验报告*1份
* 包装慢病毒
实验过程:酶切,共转染细胞,细胞培养,鉴定,纯化,测定浓度
提供结果:
(1)、实验报告*1份
(2)、转染后图片*1份
(3)、包装好的病毒*1份(检测滴度)
八、RNA干扰服务
近年来研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性降解,导致其相应基因的沉默。
这种转录后基因沉默的机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi):
1、siRNA的设计及合成,由客户自行设计,或由公司代为设计目前已证实的siRNA,以及阴性对照,并由DNA合成仪合成
2、构建RNAi干扰载体,PCR及测序鉴定
3、PCR检测mRNA表达以及western blotting检测蛋白的表达
提供结果:
1、PCR鉴定图片*1份
2、提供测序报告*1份
3、酶切鉴定图片*1份
4、RT-PCR电泳图*1份
5、western blotting结果*1份
6、实验报告*1份
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