ELISA试剂盒基本原理限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶(水解磷酸二酯键)。根据酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰酶活性，可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大类。通常所指的DNA限制性核酸内切酶就是Ⅱ型酶。
主要试剂重组质粒DNA插入片段300bp本实验所用限制性核酸内切酶为EcoRⅠ，其识别顺序为：5′----G↓AATTC----3′3′----CTTAA↑G----5′磷酸二脂键断裂产生5′粘性末端。
1.反应体系的建立：⑴在一无菌1.5mleppendorf管中加入：无菌双蒸水7μl10×酶切缓冲液
2μl质粒DNA(100ng/μl)10μlEcoRⅠ(5U/μl)1μl总体积为20μl⑵轻轻混匀，12000rpm离心5sec。2.37℃水浴1h。
3.将Eppendorf管置65℃水浴中10min，通过加热使酶失活以终止反应。
4.12000rpm离心5sec，将管盖及管壁上的水离下。
5.取10μl消化产物，与2μl6×上样缓冲液混匀，琼脂糖凝胶电泳检测消化效果，电泳条件：约100V30～60min。
6结果观察。操作注意事项：
1.吸样量一定要准确
2.为了不使酶污染而导致浪费，zui后才加酶
3.要求在冰上操作，并充分混匀，
4.开启Eppendorf管时，手不要接触到管盖内面，以防污染。
5.样品在37℃与65℃保温时，将离心管盖严，以防水进入管内造成实验失败。
限制性内切酶酶解中常见的问题和原因
1.DNA*没有被限制性内切酶切割：①限制性内切酶失活;②DNA不纯，含有SDS、有机溶剂、EDTA等;③非限制性内切酶反应条件;④酶切位点被修饰;⑤DNA上不存在该酶的识别顺序。
2.DNA切割不*：①限制性内切酶活性下降或稀释不正确;②DNA不纯或反应条件不佳;③酶切位点被修饰;④部分DNA溶液粘在管壁上;⑤酶切后DNA粘末端退火。
3.DNA片段数目多于理论值：①限制性内切酶星号活力;②存在第二种限制性内切酶污染;③样品DNA中含有其它DNA。
phospho-BRaf磷酸化B-Raf抗体
BACH2转录调节蛋白BACH2抗体
Bacillusanthracislethalfactor炭疽杆菌致死因子LF抗体
ProteinBOC蛋白BOC抗体
BP1氨肽酶A抗体
BNP脑钠素/利钠肽抗体
Bcl-2betaBcl2beta蛋白抗体
Bonesialoprotein骨涎蛋白抗体
Bim细胞死亡调解子抗体
BIRC6Apollon凋亡抑制蛋白抗体
BONZO细胞表面趋化因子受体6抗体
betaendorphinβ-内啡肽/βendorphin抗体
ELISA试剂盒
