一、操作流程
1、常规石蜡切片(4μm)脱蜡至水;
2、PBS洗3×3min;
3、柠檬酸盐98℃15min;
4、5μg/ml蛋白酶K 37℃5min，PBS洗3×3min。
5、0.1mol/L*PBS洗10min.
6、0.25%乙酸酐的0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0)洗10min，PBS洗10min。
7、预杂交 0.2×SSC＋50％甲酰胺60min 37℃。
8、杂交：每片滴加30μl杂交液（每ml杂交液含锁探针15ul,约1.5pM）用干净的盖玻片复盖，95℃变性8min,立即将切片置于冰上复性，55℃杂交过夜(约18h)。elisa试剂盒
9、杂交后洗：
⑴用60℃5×SSC洗去盖玻片(洗下盖片即可,约5min)；
⑵0.2×SSC洗短暂室温;
⑶0.2×SSC洗60℃中温育60min;
⑷滴加阻断试剂,并孵育10min;
10、免疫组织化学检测：
⑴3%H2O2阻断内源性过氧化物酶 室温 10min;
⑵滴加McAb 抗Dig IgG一抗(REF/Cat.No.84-0146,lot#:305359;invitrogen公司产品) 37℃30min;
⑶PBS(内含0.05%Tween20)洗3×3min
⑷羊抗鼠-HRP多聚物酶标二抗(REF/Cat.No.84-0150,lot#:651671A;invitrogen公司)
⑸PBS(内含0.05%Tween20)洗3×3min;
⑹0.04%DAB+0.05%H2O210-30min;
⑺Mayer’s苏木精轻微复染，显色完成后流水终止反应
↓1％盐酸酒精10秒分色
↓自来水冲洗5分钟×2次
↓氨水溶液30～60秒
↓自来水冲洗3～5分钟。
脱水、透明、封片
