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磷脂酶a2受体抗体试剂盒实验原理及组成和配制

阅读:230发布时间:2019-3-12

磷脂酶a2受体抗体试剂盒实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中sPLA2水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体往包被单抗的微孔中依次加入sPLA2抗原、*化的抗人SPLA2抗体、HRP标记的亲和素,经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的SPLA2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1.酶联板:一块(96孔)

2.标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后又反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为2.000pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释2.000pg/ml,1.000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.2pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml,临用前15分钟内配制。

如配制1.000pg/ml标准品:取0.5ml 2.000pg/ml的上述标准品加入含有0.5pg/ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

3.样品稀释液:1x20ml/瓶。

4.检测稀释液A:1x10ml/瓶。

5.检测稀释液B:1x10ml/瓶。

6.检测溶液A:1x120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比列配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B:1x120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。

8.底物溶液:1x10ml/瓶。

9.浓洗涤液:1x30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.终止液:1x10ml/瓶(2N H2so4)。


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