早期生长应答因子4(EGR4)ELISA试剂盒标本说明
早期生长应答因子4(EGR4)ELISA试剂盒试验原理：
BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和*标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
早期生长应答因子4(EGR4)ELISA试剂盒自备材料
1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
早期生长应答因子4(EGR4)ELISA试剂盒操作注意事项
1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
早期生长应答因子4(EGR4)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
早期生长应答因子4(EGR4)ELISA试剂盒操作步骤
1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9．在450nm波长处测定各孔的OD值。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。
早期生长应答因子4(EGR4)ELISA试剂盒性能
1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
早期生长应答因子4(EGR4)ELISA试剂盒结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的BFGF标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的BFGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-800pg/ml
4、敏感度： 1.0 pg/ml
葡萄糖酪胨琼脂 250g 用于食品中腊样芽孢杆菌鉴定和计数（APHA方法）
Dextrose Casein-peptone Agar
*（1万单位） 1万单位*5支 添加于100mlHB0249或HB0280或HB0248-1或HB0248中
Polymyxin B
*肉汤基础 250g 用于蜡样芽孢杆菌的*试验
Lysozyme Broth Base
脱纤维羊血 50ml 每100mlHB0251中加入7ml脱纤维羊血
Off fiber sheep blood
*（1000IU*5） 3.3mg/支*5 每支添加于100mlHB0249中
* 2.25万单位*5支 添加到HB0249-1中
含225mL胰酪胨大豆多粘菌素肉汤均质袋 10个/包 用于蜡样芽孢杆菌的检测
D-*发酵管（枯草芽孢杆菌） 20支 用于枯草芽孢杆菌生化试验
丙酸盐（枯草芽孢杆菌） 20支 用于枯草芽孢杆菌生化试验
胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础 250g 用于蜡样芽孢杆菌选择性的增菌培养
Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base
肝汤 250g 用于嗜热菌芽孢的鉴别培养
Liver Broth
改良*卵黄多粘菌素琼脂基础 250g 用于蜡样芽孢杆菌分离培养和计数
Mannitol-Egg-Yolk-Polymycin Agar Base,Modified
NAC琼脂培养基 250g 用于绿脓假单胞菌的分离培养
NAC Agar Medium
NAC液体培养基 250g 用于绿脓假单胞菌的增菌培养
NAC Solid Medium
NGKG寒天基础培地 250g 用于食品中蜡样芽孢杆菌分离培养
NGKG Medium
产气荚膜梭菌、肉毒梭菌、厌氧菌检验培养基
D-环* 0.2g 每支过滤除菌后添加于500mlSC琼脂基础或500ml TSC中
D-cycloserine
产芽孢肉汤 250g 用于产气荚膜梭菌的产芽孢培养(SN标准)
Sporulation Broth
*（1.2mg） 1.2mg/支*5 每支添加于100mlSPS中
Polymyxin B
多价蛋白胨-酵母膏（PY）培养基 250g 用于产气荚膜梭菌的培养(SN标准)
Poly Peptone Yeast Extract Medium
动力-硝酸盐培养基 250g 用于产气荚膜梭菌的动力试验
Power - nitrate medium
梭菌鉴别琼脂（DCA） 250g 用于干燥食品亚硫酸盐还原梭菌的计数和培养
Differentia Clostridial Agar
强化梭菌鉴别琼脂（DRCA） 250g 用于食品和其它物质中梭菌的计数和培养（MERCK方法）
Differentia Reinforced Clostridial Agar
强化梭菌琼脂 250g 用于梭菌的分离培养
Reinforced Clostridium Agar
强化梭菌培养基（RCM） 250g 用于梭菌的分离培养
Reinforced Clostridium Medium
TSN琼脂 250g 用于产气荚膜梭菌的平板计数
TSN Agar
TBB培养基 250g 用于乳酪产品中梭菌的计数
Tyrobutyricum Broth Base
CHO培养基基础 250g 用于厌氧菌的糖生化反应
CHO Medium Base
SCHAEDLER琼脂 250g 用于厌氧菌的分离培养
SCHAEDLER AGAR
厌氧菌琼脂 250g 用于厌氧菌的分离培养
Anaerobic Agar
CDC厌氧菌琼脂 250g 用于厌氧菌的分离培养
CDC Anaerobic Agar
亚硫酸盐还原厌氧菌孢子液体培养基 250g 用于亚硫酸盐还原厌氧菌孢子的增菌培养。
Sulfite Reducing Anaerobes Spore Liquid Medium
疱肉培养基（液体）（试管） 1支 用于肉毒梭菌及厌氧梭状芽孢杆菌的检验(GB标准)。
Cooked Meat Medium Base
*钠溶液（12mg） 1ml*5 每支添加于100mlSPS中
Sodium sulfadiazine
WILKINS-CHALGREN琼脂 250g 用于厌氧菌的分离培养
WILKINS-CHALGREN Agar
MCP琼脂 250g 用于产气荚膜梭菌的计数和培养
MCP Agar
SC琼脂基础 250g 用于产气荚膜梭菌的计数和培养，需天极D-环*和50%卵黄乳液（ISO标准）
Sulfite Cycloserine Agar Base
