1、准备安瓿管 选用内径5mm ，长10.5cm 的硬质玻璃试管，用10%的HCI浸泡8-10h 后用自来水冲洗多次，zui后用去离子水洗1-2次，烘干。将印有菌名和接种日期的标签放入安瓿管内，有字的一面朝向管壁。管口加棉塞，121℃灭菌30min 。
2、制备脱脂牛奶 将脱脂奶粉配制成20%乳液，然后分装，121℃灭菌30min，并做无菌试验。
3、准备菌种 选用无污染的纯菌种，培养时间，一般细菌24-48 h，酵母菌为3d ，放线菌与丝状真菌7-10 d。ELISA试剂盒
4、制备菌液及分装 吸取3m L 无菌牛奶直接加入斜面菌种管中，用接种环轻轻搅动菌落，再用手摇动试管，制成均匀的细胞或孢子悬液。用无菌的长滴管将菌液分装于安瓿管底部，每管装0.2 m L。
5、预冻 将安瓿管外的棉花剪去并将棉塞向里推至离管口约15 mm处（图示），再通过乳胶管把安瓿管连接于总管的侧管上，总管则通过厚壁橡皮管及三通短管与真空表及干燥瓶、真空泵相连接（图示），并将所有安瓿管浸入装有干冰和95%乙醇的预冷槽中，此时，槽内温度可达-40—-50℃，只需冷冻1 h左右，即可使悬液冻成固体。
6、真空干燥 完成预冻后，升高总管使安瓿管仅底部与冰面接触，此时温度约-10℃，以保持安瓿管内的悬液仍呈固体状态。开启真空泵后，应在5-15 min内使真空度达66.7 Pa 以下，使被冻结的悬液开始升华，当真空度达到26.7-13.3 Pa时，冻结样品逐渐被干燥成白色片状，此时使安瓿管脱离冰浴，在室温下（25-30℃），升温可加速样品中残余水分的蒸发。总干燥时间应根据安瓿管的数量，悬浮液装置及保护剂性质来定，一般3-4 h。
7、封口 样品干燥后继续抽真空达1.33Pa时，在安瓿管棉塞的稍下部位用酒精喷灯火焰灼烧，拉成*并熔封（图示），然后置4℃冰箱中保藏。ELISA试剂盒
8、恢复培养 用75%乙醇消毒安瓿管外壁后，在火焰上烧热安瓿管上部，然后将无菌水滴在烧热处，使管壁出现裂缝，放置片刻，让空 气从裂缝中缓慢进入管内后，将裂口端敲断，这样可以防止空气因突然开口而进入管内使菌粉飞扬。将合适的培养液加入冻干样品中，使干粉充分溶解，再用无菌水 的长颈滴管吸取菌液至合适培养基中，放置在zui合适温度下培养。
冷冻干燥保藏法综合利用了各种有利于菌种保藏的因素，如低温、干燥和缺氧等，是目前zui有效的菌种保藏方法之一。保存时间可达10年以上
