详细介绍
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)鲤鱼尾鳍细胞;YZ16培养准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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产品描述:
细胞名称 鲤鱼尾鳍细胞;YZ16培养
形态特性上皮细胞样
生长特性贴壁生长
特征特性鲤尾鳍细胞由长江水产所建立鉴定,用于鲤尾鳍鱼基础研究和病毒疾病防治研究。
培养条件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
传代方法1:3传代,2-3天传一代
传代情况C15
冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测阴性
STR
同工酶同工酶鉴定
染色体
注意事项:
1.一般客户拿到鲤鱼尾鳍细胞;YZ16培养后,应该注意什么?
客户收到细胞先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞时的培养基拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题,不予以重发的情况有哪些?
(1)客户造成细胞污染,不重发;
(2)客户不正确操作致细胞状态不好,不重发;
(3)非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发;
(4)细胞状态不好,未提供细胞培养前3天照片的,不重发;
(5)细胞培养时经其它处理的,不重发;
(6)细胞收到2天内,未告知,不重发;
(7)视具体情况而定。
C57BL/6小鼠T细胞淋巴瘤细胞;RMA
ASL Others Human 人 Arginosuccinase / ASL 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
原代平滑肌细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装:1ml
MN-c, 小鼠皮质神经元 小鼠脂肪细胞,3T3-L1细胞 SP2/0(骨髓瘤细胞)
人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B
IL1RL1 Others Human 人 IL1RL1 / ST2 人细胞裂解液 (阳性对照)
鲤鱼尾鳍细胞;YZ16培养HCC827 人非小细胞肺癌细胞 1ml/T75
NCI-H460 人大细胞肺癌细胞 1ml/T75
A549 人肺癌细胞 1ml/T75
NCI-H1395 人肺腺癌细胞 1ml/T75
冷冻保存细胞之方法:
鲤鱼尾鳍细胞;YZ16培养冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。