新型血小板相关内皮分泌蛋白SCUBE1抗体的生wu素化标记实验要点:

1. 费用 如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸qing钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析;

2.所用的NHSB及待生wu素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件;

3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活;

4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等;

5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生wu素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性;

6.生wu素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及ben酚基,也可与糖基共价结合;

7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生wu素会对生wu素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用;

8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。

小鼠P物质(mouse Substance P)

小鼠催乳素(mouse PRL)

小鼠孕酮(mouse PROG)

小鼠睾酮(mouse TESTO)

小鼠胸腺活化调节趋化因子(mouse TARC)

小鼠组织因子(mouse TF)

小鼠组织因子抑制物(mouse TFPI)

小鼠转化生长因子-β1(mouse TGF-β1)

小鼠转化生长因子-β2(mouse TGF-β2)

小鼠可溶性粒细胞靶受体(mouse sTREM-1)

小鼠端粒酶(mouse Telomerase)

小鼠Toll样受体-2(mouse TLR-2)

小鼠Toll样受体-4(mouse TLR-4)

小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-1(mouse TIMP-1)

小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-2(mouse TIMP-2)

小鼠肿瘤坏死因子-a(mouse TNF-a)

小鼠肿瘤坏死因子-b(mouse TNF-b)

小鼠肿瘤坏死因子-r(mouse TNF-r)

小鼠组织纤溶酶原激活剂(mouse t-PA)

小鼠转铁蛋白(mouse Transferrin)