小鼠角膜上皮细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

苏云金芽胞杆菌加拿大亚种 Bacillus thuringiensis subsp. canadensis

苏云金芽胞杆菌科尔默亚种 Bacillus thuringiensis subsp. colmeri

苏云金芽胞杆菌达尔可他亚种 Bacillus thuringiensis subsp. dakota

苏云金芽胞杆菌达姆斯塔特亚种 Bacillus thuringiensis subsp. darmstadiensis

苏云金芽胞杆菌松蜀亚种 Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

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