普氏立克次体(RP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)标准操作步骤：

1.液氮充分研磨样品。

2.收集研磨成粉末的50mg样品，置于1.5ml离心管中。

3.加入350μl65℃预热的缓冲液IL，并加入20μl蛋白酶K剧烈地漩涡振荡，确保所有的组织团都分散均匀。

4.65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。

5.加入350μl，充分混匀，12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。

7.加入4μl RNase A，涡旋混匀。室温放置2min。

8.加入二分之一上清体积的缓冲液IB与等体积的无水乙醇，充分混匀。如：向300μl上清中加入150μl缓冲液IB与300μl无水乙醇。

9.把上述混匀的液体转移到吸附柱上。10,000×g离心1 min以结合DNA，弃去滤出液体。纯化柱*容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。

10.将吸附柱重新套回收集管中，加入500μl缓冲液WB至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

11.将吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；

13.将吸附柱重新套回2ml收集管中，转速（>13000×g）离心空结合柱1min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。

14.将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入50-150μl65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。室温静置5min；

15. 室温下，离心(>13000)1min，以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。

产品仅用于科研如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

黑人Burkitt淋巴瘤细胞；RAJI

人B淋巴细胞瘤细胞；RAMOS

人B淋巴细胞瘤细胞；RAMOS(RA.1)

人脑瘤细胞；SF126

人脑瘤细胞；SF763

人脑瘤细胞；SF767

人皮肤黑色素瘤细胞；SK-MEL-1

人肾上腺皮质癌细胞；SW-13

人结直肠癌细胞；T84

人急性单核细胞白血病细胞；THP-1

人神经胶质细胞瘤细胞；U251

人组织细胞淋巴瘤细胞；U937 [U-937]

人胃腺癌细胞；BGC-823

人低分化肺腺癌细胞；GLC-82 [GLC82]

人喉癌上皮细胞；Hep-2

人纤维肉瘤细胞；HT-1080

人绒癌细胞；JEG-3

人耐VP16绒癌细胞株；JEG-3/VP16

白介素-2转染耐VP16绒癌细胞；JEG-3/VP16-IL-2

TNFa转染耐VP16绒癌细胞；JEG-3-VP16-TNFa

人急性T淋巴细胞白血病细胞；Jurkat, Clone E6-1

人神经母细胞瘤细胞；BE(2)-M17

人乳腺癌细胞；MDA-MB-157

人成骨肉瘤细胞；MG-63

人小细胞肺癌细胞；NCI-H446

人多发性骨髓瘤细胞；RPMI-8226 [RPMI8826]

人脑瘤细胞；SF17