小鼠Wnt-3a蛋白(WNT3A)elisa检测试剂盒操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。

人胚肺二倍体细胞；KMB-17

人胚肾细胞；293 [HEK-293]

人脐静脉内皮细胞；HUV-EC

人肺细胞；HLF-a

人胚肺成纤维细胞；WI-38 [WI38]

人胎儿胸腺细胞株；HFT-8810 [HFT8810]

人胚肺成纤维细胞；HFL1

人胚肾细胞；293 [HEK-293]

人羊膜细胞；HA

人胚肺成纤维细胞；HFL-I

人肝细胞；HL-7702[L-02]

人肝细胞；QSG-7701 [QSG7701]

人胚肺成纤维细胞；WI-38 [WI38]

人张氏肝细胞；Chang liver

人羊膜细胞；WISH

人胚肺成纤维细胞；MRC-5

人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞；CCD-1095Sk

人正常乳腺细胞；Hs 578Bst

人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞；NK-92 [NK92]

人B淋巴母细胞；HMy2.CIR

人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞；NK-92MI [NK92MI]

人脐静脉内皮细胞；HUV-EC-C

人正常乳腺上皮细胞；MCF 10A

人胚肾细胞；2V6.11

人正常肺上皮细胞；BEAS-2B

人肺成纤维细胞；HFL1