动物免疫操作技术分析

免疫原用无菌盐水稀释并与佐剂混合，腹腔注射抗原与佐剂*混匀后形成的稳定乳状液，大鼠elisa试剂盒在免疫原提供持续的免疫应答基础上进行加强免疫

周期 第1天 采血0.2ml（获得0.1ml免疫前血清）

*次免疫（抗原加弗氏*佐剂）

第14天 第二次免疫（抗原加弗氏不*佐剂）

第21天 采血和ELISA检测

第35天 第三次免疫（抗原加弗氏不*佐剂）

第42天 采血和ELISA检测

第56天 第四次免疫（抗原溶于PBS或盐水）

第61天 细胞融合

大鼠elisa试剂盒操作方法

（1）小鼠腹水用冷PBS液稀释4倍后，于1.00×105转离心30min，去沉淀。

（2）在4℃于上清中缓缓滴加饱和硫酸铵液，边加边搅拌，使溶液zui终为50%硫酸铵浓度。

（3）此溶液置冰中30min~60min，然后5000r/min离心10min，去上清。

（4）将沉淀溶于Tris－HCl缓冲液（40mMol/LNaCl）中（溶液可能混浊）。

（5）装入透析袋于Tris－HCl缓冲液（20mMol/LNaCl）中透析除盐。

（6）离心去沉淀。 （7）溶液稀释（1:100或更高倍稀释）后，于280nm测蛋白含量，估计蛋白质含量1A280unit=0.8mg蛋白质一般每ml腹水中，含有总蛋白约25mg~36mg。

（8）过DEAE—纤维素柱：纤维素柱高40cm，以20mMol/LNaClTris缓冲液平衡。大鼠elisa试剂盒透析样品以Tris缓冲液等量稀释。