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ELISA实验的加样原理

阅读：768发布时间：2019-5-29

ELISA实验的加样原理

ELISA是免疫学中常用检测方法，在ELISA实验过程中加样也是极为重要的步骤之一。

正确的加样方法应为45度，吸头贴着孔壁加入，应注意角度太小，会使液体残留在孔壁上，导致加样不准确；吸头应当贴着管壁和液面的交界处！

要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。

血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8 ℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70 ℃以下。样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。

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