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解析细胞MTT的用途及原理

阅读:227发布时间:2015-5-28

悬浮细胞:

1、ELISA试剂盒收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640(无血清)培养基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培养液稀释 (储存液100mg/ml,需预试寻找*稀释度,1:10-1:20);③需检测物10ul;④细胞悬液50ul(即5×104cell/孔),共 100ul加入到96孔板(边缘孔用无菌水填充)。每板设对照(加100ml 1640)。

2、置37℃,5%CO2孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。

3、ELISA试剂盒每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4 h。(悬浮细胞推荐使用WST-1,培养4 h后可跳过步骤4),直接酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值)

4、离心(1000转x10min),小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值。

5、ELISA试剂盒同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜),每组设定3复孔。ASB10    英文名称:    含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族10抗体     0.1ml
ALDH1L1    英文名称:    乙醛脱氢酶1蛋白家族L1抗体     0.1ml
Axin 2    英文名称:    轴抑制蛋白2抗体     0.2ml
ANGPTL6    英文名称:    血管生成素相关蛋白6抗体     0.2ml
AMH    英文名称:    Muellerian缪勒管激素抑制因子抗体     0.2ml
EphA8    英文名称:    *蛋白激酶受体A8抗体     0.2ml
Acetoacetyl-CoA synthetase    英文名称:    脂肪酰*家族成员1抗体     0.2ml
ARNTL2    英文名称:    芳香烃受体核转录蛋白样2抗体     0.2ml
phospho-AANAT (Thr29)    英文名称:    磷酸化芳香胺N-乙酰化转移酶抗体     0.1ml
ABLIM1    英文名称:    肌动蛋白结合蛋白1抗体     0.2ml
AMIGO2    英文名称:    粘附分子IgG样结构域蛋白2抗体     0.2ml
Advillin    英文名称:    肌动蛋白结合蛋白DOC6抗体     0.2ml
AFG3L2    英文名称:    AFG3样蛋白2/脊髓小脑共济失调蛋白28抗体     0.2ml
AIP1    英文名称:    激活素受体相互作用蛋白1抗体     0.2ml


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