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用什么样的方法将ELISA与抗体结合起来

阅读：311发布时间：2015-2-9

ELISA（1）不影响酶及抗体活性

（2）不产生干扰物质

（3）抗体和酶结合后应有较高的产量

（4）不出现非特异性反应

（5）结合程序简便

（6）来源易、价廉

目前常用的有戊二醛和过碘酸钠二种。由于对所使用结合剂的针对性，因此标记的方法也有戊二醛交联法和过碘酸钠氧化法两类。
1、戊二醛交联法：戊二醛是一种能使蛋白质与蛋白质联结zui常用的双功能试剂。它有2个对称的活性醛基，可分别与酶蛋白和免疫球蛋白上的游离氨基（酚基、味唑基、巯基）以共价键边接起来而形成的酶结合物。

过碘酸钠氧化法：本法是目前酶标记抗体较好的方法，能使70%酶与90%以上球蛋白结合。采用本法首先是用氟代二硝基苯（Fluoro dinitro bengene 2.4—硝基苯，FDNB）封闭HRP表面的游离氨基（亦可用甲醛或戊二醛来封闭），从而提高酶结合抗体球蛋白的能力，避免酶的自身交联。然后用过碘酸钠来氧化HRP表面结构的醣链部份（即低聚醣基团）使成醛基，使其直接与抗体球蛋白上的游离氨基形成共价键而结合。zui后用硼氢酸钠还原，使HRP表面醛基能充分与抗体球蛋白上氨基进行反应，使之形成稳定的结合物。

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