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找到Z适合你实验的抗体

阅读:121发布时间:2016-11-11

 

细胞生物学家的论文手稿基本上都准备好了,这时他打算再检查核对一下他的抗体:Lange对缺失G蛋白偶联受体的小鼠样品进行染色,按道理说抗体不会出现信号。然而结果却是它显色了,专家只好把他论文中基于抗体的这部分删去,而剩下的一部分却不足以吸引人了。

这令Lange失望极了,不过值得安慰的是,他并不是*一个有此体验的实验人员,抗体可以说是生物学实验室里zui常用,也zui容易出现问题的试剂,而且这种试剂还不便宜。来自Mol Cell Proteomics杂志的一项研究指出,在被检测的5000种商用抗体中, 只有一半能在Western blotting和免疫组化实验中均有效,一些研究人员还认为问题抗体是许多科学研究无法重复的罪魁祸首。The Scientist收集的一些小Tips也许能帮助你发现实验中zui灵敏,特异性zui强,以及实验可重复的抗体。

毋庸置疑,实验前首先需要科学文献,检查一下其他研究人员追踪你的兴趣靶标时用的是什么抗体。一些厂家和(譬如 antibodypedia.com 和 CiteAb.com )都会列出抗体参考文件。

仔细的翻查这些论文,看看这些论文是否发表在期刊上?作者是否展示了全部Western blots,从中是否能看到其它非特异性条带?他们是否用了合适的对照? 

不要以为发表论文中采用zui多的抗体就你,蛋白质组学研究专家。通常每个人使用的都是前人*次用的那个抗体。

理智选择抗体产品

目前抗体市场上的一大问题就是制造厂商并不一定就是销售方。抗体目录上有这么多的种类,很少有人会去确保每种产品都有效。

为了确保购买有效的抗体,我们需要仔细审查卖方提供的资料。是否能提供令人信服的数据来确保抗体适合于你的实验?如果需要的是一种修饰后蛋白的特殊抗体,比如乙酰化后的蛋白,那么制造商施法进行了肽段array,针对几种不同的蛋白修饰进行验证。

专家建议检查供应商提供同一靶标的所有产品,如果分子量或者细胞位置在结合同一抗原的抗体之间存在差异,那么就值得怀疑。你可以挑选一些抗体进行尝试,不过值得注意的是,如果你在不同销售商处发现了同样的数据表,那么也许就是打着不同招牌,在卖同样的东西。


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