利用本实验室融合的抗AFB1杂交瘤细胞株，通过4次克隆成功筛选出3株稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的细胞株。采用间接ELISA方法对3株细胞株进行亚类和特异性鉴定，选择10D12细胞株进行单克隆抗体的大量制备。辛酸饱和硫酸铵法结合HiTrap Protein G HP亲和柱纯化后的单克隆抗体亚类主要为IgG1，亲和常数为2.85×1010L/mol，属于高亲和力抗体。SDS-PAGE电泳结果表明纯化后的单克隆抗体纯度较高，无杂蛋白。间接ELISA方法测定浓度为0.5mg/mL的纯化单克隆抗体的效价为1：16000，满足本试验的要求。采用鲁米诺-对碘*-*增强化学发光体系进行*B1间接竞争化学发光酶免疫分析方法的建立。鲁米诺、对碘*、*浓度均为1mM时的检测效果。
通过对影响反应灵敏度的各参数的优化，成功建立了AFB1间接竞争化学发光酶免疫分析方法。所建方法的直线回归方程为Logit（Y）=1.5602-4.1389log（X），IC50为2.4314μg/L，检出限为0.09μg/L，拟合曲线的线性范围为0.31μg/L20μg/L。与进口ELISA试剂盒的检测结果具有较好的相关性，表明所建方法可成功用于实际样品的检测。使用相同抗原和抗体建立的*B1间接竞争ELISA方法的检测限为0.56μg/L，线性范围为0.6310μg/L。所建ELISA方法与AFG1的交叉反应率为14.765%，与其它参试毒素的交叉反应率均小于3%，表明具有较好的特异性。所建立的间接竞争化学发光酶免疫分析方法与间接竞争ELISA方法相比，灵敏度提高了6倍，同时线性范围也宽于ELISA方法。初步组装的化学发光酶免疫分析试剂盒和ELISA试剂盒均可在4度保存3个月以上。
