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YPD 肉汤

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更新时间：2018-03-06 00:16:15浏览次数：229次

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上海沪震实业有限公司

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产品简介

YPD 肉汤
是一种能够自动诱导由乳糖操纵子调控的目的蛋白质表达的培养基。该培养基有利于大肠杆菌的高水平生长，且无需监测细胞生长状态、无需加入诱导物（如IPTG）即可高水平自动诱导表达目的蛋白。现货供应。咨询！

详细介绍

YPD 肉汤特殊培养法

二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为：

1.吸除旧培养液注入另瓶中。

2.用温BSS冲洗1次。

3.用0.25%温*消化，加入消化液量以仅覆盖细胞层即可；作用1~5分钟。

4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大，便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液（新旧培养液按2：1新旧混合）。

5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。

6.按一分为二比例接种培养。

使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法：

1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞，90%汇合时制成细胞悬液，再按105细胞/毫升重新接种培养。

2.在细胞半汇合时，准备0.25μg/ml的丝裂霉素C，按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜；或用射线单次照射，剂量30～50戈瑞。

3.细胞经上述处理后，Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时，*消化细胞制成悬液，按5×104（104细胞/cm2）接种入新YPD 肉汤中。

4.48小时后，即可用于细胞克隆之用。

YPD 肉汤细胞分离（克隆）培养

多孔塑料培养板单细胞克隆法：

1.消化：取健康待克隆细胞，吸出瓶内培养液，加消化液。

2.低密度细胞悬液的制备：做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液，然后稀释细胞，使之成为1~2细胞/毫升悬液，zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。

3.接种：先用吸管轻轻吹打细胞悬液，使混悬均匀，继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确，争取在zui短时间内加完，以免培养液蒸发，然后迅速盖好盖板，置CO2温箱培养。

4.标记：培养6~12小时后，待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后，从温箱中取出，置倒置光显微镜台上，观察和标记下含有单个细胞的孔，置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液，只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基，但不要吸除过多，余少许，以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液，继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时，可进行分离培养。

5.分离扩大培养：培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔，先吸除旧培养液，用Hanks洗1~2次，继加*少许，加入量已能覆盖细胞群即可，如过多，应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视，待发现细胞变圆时，加入0.1ml含10%血清的克隆培养基，用吸管轻轻吹打，当细胞离开底物悬浮后，一并吸入管内，移入另瓶或皿中，再补加一定量克隆培养液，置CO2温箱中继续培养、增殖，使之形成新的细胞群后，即转用常规培养法培养。

YPD 肉汤相关产品如下：RBL-1   大鼠嗜碱性粒细胞白血病
MV-1-Lu   鼬肺上皮细胞
NIH3T3   小鼠胚胎成纤维细胞
293   人胚肾细胞
L929   小鼠成纤维细胞
293T   人胚肾T细胞
HSC-T6   大鼠肝星状细胞
GES-1   人胃粘膜细胞
L-02   人肝细胞
Lewis   肺癌细胞
EAC   艾氏腹水瘤细胞
LA795   肺腺癌细胞
S180   腹水瘤细胞
H22   肝癌细胞
B16   黑色素瘤细胞
MPC-83   胰腺腺泡癌细胞
C3   白血病细胞
RIN-m5F   β胰岛素瘤
L1210   淋巴白血病细胞
MA891   乳腺癌细胞
TA2   自发高乳腺癌细胞
SP2/0   骨髓瘤细胞
U14   宫颈癌细胞
YAC-1   淋巴瘤细胞
G422   神经胶质瘤细胞
TC-1   HPV16，E6,E7和ras基因共转化的C57BL/C(H-2b)小鼠肺上皮细胞
SRA01/04   人晶体上皮细胞系
MCF-7   乳腺腺癌细胞
CNE-1   高分化鼻咽癌细胞
MEF-7/Adr   乳腺腺癌*耐药株
KB   口腔表皮样癌细胞
SK-BR-3   乳腺腺癌细胞
Hep-2   喉癌细胞
A2780   卵巢癌细胞
Ec109   食管癌细胞
Coc2   卵巢癌细胞