检测原理大鼠肝癌细胞,Walker-256细胞
细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别，细胞繁殖以分裂方式进行。细胞作为一个独立生命单位，既有生长繁殖，也有衰老死亡。细胞衰老是生物有机体衰老的基础。在多细胞生物的个体发育过程中，细胞常常分化成各种构造和功能不同的细胞，如肌细胞、红细胞和神经细胞等都属于高度分化的细胞。当细胞发生癌变时，细胞便丧失其原来正常的功能，并无休止地分裂，形成肿瘤。
大鼠肝癌细胞,Walker-256细胞操作方法
固定 | 培养细胞的制片或冰冻切片用4%多聚甲醛固定30min(4℃)后，用80%酒精再固定2h（-20℃）。常规4%中性福尔马林固定、石蜡包埋之切片进行脱蜡、水化。 |
洗涤 | 玻片浸入PBS缓冲液，摇床上洗涤5min，三次。 |
反应 | 洗涤后的玻片用吸水纸吸干细胞或组织周围水分，按50μl/cm2滴加反应液（每50μL反应液含TdT酶0.5μL,标记的-dUTP 1μL），使反应液均匀地覆盖于所有细胞或组织切片上，盖上塑料盖玻片，置湿盒中，37℃孵育1h。 |
终止反应 | 去掉塑料盖玻片，将玻片置盛有洗涤缓冲液的染色缸内，洗涤两次，每次5min。 |
FITC标记 | 洗涤后的玻片用吸水纸吸去细胞或组织周围水分，按50μl/cm2滴加FITC反应液（含FITC 2.5μg/mL），室温下避光孵育10min。 |
洗涤 | 将玻片置于洗涤缓冲液内，洗两次，每次5min。 |
PI复染 | 将玻片置于盛有PI染液的染色缸内，室温下避光染色30min。 |
封片 | 用盖玻片直接盖在含PI染液的玻片上，亦可用无色指甲油涂于盖玻片四周边缘，置暗盒中，尽早镜检观察。 |
交货时间 | 15~20天 |
大鼠肝癌细胞,Walker-256细胞传代：
1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2.把原有培养基吸掉。
3.加适当的*(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。
4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5.用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
6.把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
7.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
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