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纺锤体检查点蛋白抗体的概念:
Z初有人用电泳证明血清中抗体活性在γ球蛋白部分,故曾把抗体统称为丙种(γ)球蛋白。后来发现,抗体并不都在γ区;并且位于γ区的球蛋白,也不一定都具有抗体活性
纺锤体检查点蛋白抗体(antibody,Ab)是机体免疫系统受到抗原刺激后产生的特异性球蛋白,称免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。根据其重链稳定区的分子结构和抗原性的不同,可将为类Ig分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等五大类。由遗传基因决定所产生的抗体,称天然抗体(natural antibody),由抗原激发免疫细胞产生的抗体,称免疫抗体(immune antibody)或称特异地性抗体。人工制备的特异性抗体又可分为多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体三种类型。
纺锤体检查点蛋白抗体抗血清的鉴定
抗血清的效价可根据抗体的不同性质,分别采用环状沉淀试验、琼脂双向扩散、单向免疫扩散、溶血试验、凝集反应、酶免疫反应及放射免疫等方法进行测定。检查抗血清的纯度可采用免疫电泳、琼脂双向扩散及交*反应试验等方法检测。
1)取适量Protein A+G Beads悬液,装入层析柱,用10倍柱体积的PBS(或者TBS,下同)洗涤平衡层析柱。
2)含抗体的血清或其它体液高速离心后,将上清与等体积2×PBS缓冲液混合,调整pH以及离子浓度后(确认pH值为7±0.5),缓慢加入层析柱。
3)用10倍柱体积以上的PBS洗涤,至流出液无蛋白检出。
4)加入2倍柱体积0.1 M 柠檬酸(Citrate Acid, pH 2.7)封闭流出管,静置5分钟后收集穿出液,重复三次。测定 OD280估算抗体浓度,如果所得抗体较多可以使用SDS-PAGE检测纯度。也可以选择0.1 M*(Glycine, pH 3.0)洗脱。
5)洗脱后的抗体立即加入2/5体积的1 M Tris,pH 9.0中和,使用Millipore蛋白浓缩管切换到所需缓冲液,或者透析,缓冲液通常为PBS含有0.02% NaN3以及1 mM EDTA。
6)浓缩到所需体积,加入50%甘油;测定效价后,分装并保存在-20℃,避免冻结。
的特异性是指对相应抗原或近似抗原物质的识别能力。特异性高,抗体识别能力就强,通常以交*反应率来表示。交*反应率可用竞争抑制试验测定。
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