ELISA试剂盒抗原的特异性IgM抗体操作步骤

ELISA试剂盒抗原的特异性IgM抗体操作步骤

    由于一个亲和素可与4个生物素分子结合，因此如把ABS与ELISA试剂盒法可分为酶标记亲和素-生物素（LAB）法和桥联亲和素-生物素（ABC）法两种类型。两者均以生物素标记的抗体（或抗原）代替原ELISA试剂盒系统中的酶标抗体（抗原）。

    在LAB中，固相生物素先与不标记的亲和素反应，然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期，亲和素从蛋清中提取，这种卵亲和素为碱性糖蛋白，与聚苯乙烯载体的吸附性很强，用于ELISA试剂盒中可使本底增高。从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点，在ELISA试剂盒应用中有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA试剂盒较普通ELISA试剂盒多用了两种试剂，增加了，在临床检验中ABS-ELISA试剂盒应用不多。  后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。

    因此如用抗人IgM作为二抗，间接测定IgM抗体，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理，以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相，ELISA试剂盒以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对和非特异性的IgM）。然后加入抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。

    后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人IgM作为二抗，间接测定IgM抗体，ELISA试剂盒必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理，以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM）。

    然后加入抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。ELISA试剂盒与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，ELISA试剂盒可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。