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免疫荧光技术的实验步骤

时间:2023/10/3阅读:947
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     免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位。免疫荧光技术的实验步骤:

一、准备好试剂与仪器:

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。


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