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动物组织总蛋白提取

时间:2021/12/21阅读:646
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  变性总蛋白提取(SD-001)
 
  以下步骤是从 15-20 mg 组织中提取,对于昆虫组织,例如果蝇,使用 15-20 个幼虫,蛹或成虫样本。如果起始量较大或者较小,需调整相应裂解液的用量比例。
 
  1. 将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷
 
  2. 将 15-20 mg 组织放置于离心管柱上,用塑料棍扭转研磨 50-60 次,加入 200ul 细胞裂解液,继续研磨 30-60 次。(组织用量不要过量,无需过度研磨,裂解液可分两次加入以得到最佳效果)注意:塑料研磨棒可以重复使用,用蒸馏水*冲洗干净,用纸巾擦干。
 
  3. 盖上盖子室温孵育 1-2 分钟,14000-16000rpm 离心 1-2 分钟取出。
 
  4. 立刻将收集管放置于冰上,弃去离心管柱,蛋白提取完成可应用于下游实验。
 
  请注意:部分未*裂解的组织不会影响样品质量。
 
  天然总蛋白提取(SN-002)
 
  1. 将天然细胞裂解液(SN-002),离心管柱及接收管套管放在冰上预冷。
 
  2. 将 15-20 mg 组织放置于离心管柱上,用塑料棍扭转研磨 50-60 次,加入 200ul 天然细胞裂解液(SN-002),继续研磨 30-60 次。(组织用量不要过量,无需过度研磨,裂解液可分两次加入以得到最佳效果)。注意:塑料研磨棒可以重复使用,用蒸馏水*冲洗干净,用纸巾擦干。
 
  3. 开盖冰上孵育 5 分钟,盖上盖子,4℃,14000-16000rpm 离心 1-2 分钟取出。
 
  4. 立刻将收集管放置于冰上,弃去离心管柱,蛋白提取完成可应用于下游实验。
 

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