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线粒体膜电位探针使用指南

阅读:372发布时间:2015-3-16

ELISA在评估线粒体功能时,常常要用到监控线粒体膜电位的探针,就是大家常常提到的JC-1、Rhodamine 123等。然而,在使用过程中,还需要仔细考虑多个控制,以及非质子电荷对染料行为的影响,才能正确地阐释结果。为此,美国罗彻斯特大学医学及牙医学院的研究人员撰写了一篇使用指南,讨论了实验过程中一些重要的技术考虑、控制以及平行互补分析。文章发表在一期的《BioTechniques》上。

近年来,测量线粒体膜电位的荧光染料已成为常用的工具,来监测重要的线粒体参数的改变。线粒体膜电位本身是细胞健康或受损的重要指示剂。而这些染料一般是亲脂性阳离子化合物,它们在线粒体膜基质空间中积累,呈反比。

测量线粒体膜电位的染料有很多种,包括TMRM、TMRE、Rhodamine 123、DiOC6(3)、JC-1等,每一种都有其优势和劣势。ELISA作者在文章中就介绍了常用染料的优势以及潜在的困难,并强调了在生命科学研究中突出其有效应用的*方法。

对于如何计划实验,作者也给出了具体的建议。ELISA通常有两种类型的实验:*种,在细胞或组织的慢性处理之后,ELISA研究人员希望确定如何改变;第二种,研究人员希望监测急性处理相对应的Δψm变化。尽管乍一看,第二种方法似乎更为困难,但实际上每个样品/条件都能充当急性处理前的基线或内对照,因此通常能提供更容易阐释的结果。作者还详细讨论了两种方法的考虑因素。


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