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技术文章

鸡ELISA试剂盒抗体测定结果

阅读:566发布时间:2015-2-5

    鸡ELISA试剂盒引起鸡ELISA试剂盒测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。本文就标本因素对ELISA测定的影响做如下讨论。
(1)类风湿因子
人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)可以与鸡ELISA试剂盒系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合,从而导致假阳性。ELISA试剂盒解决该情况的办法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②标本用联有热变性(63℃,10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效);③检测抗原时,可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中,使RF降解。
(2)补体
鸡ELISA试剂盒系统中固相一抗和标记二抗过程中,抗体分子发生变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q 可以将二者连接起来,从而造成假阳性。解决的办法是:①用EDTA稀释标本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加热血清使C1q灭活。
(3)嗜异性抗体
人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体,可将鸡ELISA试剂盒系统中一抗和二抗连接起来,也能造成假阳性。解决的办法是:可在标本稀释液中加入过量的动物Ig (s) ,但加入量不足或亚类不同时无效。
(4)嗜靶抗原的自身抗体
抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,在ELISA方法中均可干扰抗原。为避免以上情况出现,解决的办法是:测定前需用理化方法将其解离后再测定。


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