农杆菌介导转化法
将外植体放入含有外源基因的农杆菌(Agrobacteriumtume／ociens)菌液中浸泡,然后转入共培养基,再转入筛选培养基诱导抗性愈伤组织和抗性芽,植物ELISA试剂盒生根后的抗性植株移栽至营养钵生长.
基因枪法
又称微弹轰击法.其基本原理是将外源DNA黏附在微小的金粒或钨粒表面,然后在高压的作用下,微粒被高速射入受体细胞或组织,微粒上的外源DNA进入细胞后,整合到植物染色体上,得以表达,从而实现基因的转化.
花粉管通道法
在植物授粉时将含目的基因的DNA溶液涂于柱头上,利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道,将外源DNA导入受精卵细胞,并进一步地整合到受体细胞的基因组中,随着受精卵的发育而成为含转基因的新个体.该方法于80年代初期由我国学者周光宇提出.我国目前推广面积zui大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的.该法的zui大优点是不依赖组织培养人工再生植株,技术简单,不需要装备精良的实验室,常规育种工作者易于掌握.
微注射法
首先制备植物原生质体,游离出细胞,在倒置显微镜和显微操作器的帮助下,将目的基因DNA通过微管注射到受体细胞中.
电穿孔法
在短时间的高压直流电脉冲的冲击下,可以使原生质膜的分子疏松,形成暂时性的直径为3～4nl-n的小孔,但对原生质体生活力影响不大.这时,存在于原生质体周围溶液中的外源DNA,就可以通过这种小孔进入原生质体,实现基因的直接转移.
