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上海丽臣商贸有限公司
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阅读：327发布时间：2014-06-25
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使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中流行性出血热抗体(EHF-Ab)表达。
实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人流行性出血热抗体(EHF-Ab)表达。用纯化的人流行性出血热抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中流行性出血热抗体相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的流行性出血热抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人流行性出血热抗体(EHF-Ab)的存在与否。
试剂盒组成
1 | 20倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 3ml×1瓶 |
2 | 酶标试剂 | 3ml×1瓶 | 8 | 阳性对照 | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶标包被板 | 12孔×4条 | 9 | 阴性对照 | 0.5ml×1瓶 |
4 | 样品稀释液 | 3ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
5 | 显色剂A液 | 3ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
6 | 显色剂B液 | 3ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
1. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将
2. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
3. 样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
5.
6. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
7. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
8. 温育：操作同3。
9. 洗涤：操作同5。
10. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
11. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
12. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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