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2014公司ELISA试剂盒实验基础知识培训

阅读:253发布时间:2014-3-18

在做ELISA试剂盒实验过程中,难免会遇到各种不同的问题,比如标准曲线不好,试剂盒的回收率,假阴性,假阳性,实验的重复性不好等等。现在就来一一解答用户们在实验过程中遇到的各种疑问!
ELISA试剂盒曲线问题: 

1.OD值不正常

试剂盒未回温,试剂盒回温到25℃

温度控制不好,控制正确温度

孵育时间不准确,控制孵育时间

洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增 加,洗涤4-5次,每孔250ul,然后拍干

阳光直射,对着风直接吹,避风避

酶标仪的波长错误,ELISA试剂盒酶标仪的波长450nm

抗体的稀释错误,正确的稀释抗体

水质问题,用娃哈哈矿泉水代替

2.白   板

洗涤液配制错误,正确的配制洗涤液

少加液体(错加液体),正确的步骤加液体

3.无 梯 度

标准品也污染,换标准品点板

OD值不正常,控制温度时间在做一次

人为点板,不要点板

4.线 性 不 好

OD值不正常,控制温度时间在做一次

ELISA试剂盒回收率

1.空白管阳性高

样本本身就是阳性样本,换阴性样本做回收率

空白管在实验中被污染,实验中防止交叉污染

水质原因用,娃哈哈矿泉水代替

2.偏  高

添加量不准确,的添加量

添加浓度不适合,添加合适的浓度

取液吹干量多,准确的取液吹干

取到其它相层液体,取需用相吹干

复溶液未稀释或加入量少,正确的稀释复溶液

ELISA试剂盒3.偏  低

添加量不准确,的添加量

添加浓度不适合,添加合适的浓度

取液吹干量少,准确的取液吹干

复溶液稀释错误或加入量多,正确的稀释复溶液

假阴、阳性

1,水质原因:点复溶液验证,用娃哈哈矿泉水代替

2,实验操作原因

吸取到其它相吹干,准确的取液吹干

离心不*,延长离心时间

样本的污染,更换样本

乳化未处理*,温浴(70℃)处理乳化现象

3,仪器试剂原因

离心管未清洗干净,正确的洗涤器具

有机溶剂的影响,ELISA试剂盒做试剂空白看影响结果

4,衍生化试剂原因(长时间衍生化试剂变质),更换衍生化试剂

5,与曲线好坏相关,,保证曲线的正常


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