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细胞冻存与复苏方法

阅读：396发布时间：2015-7-15

细胞冻存方法
　　
　　1．细胞：选对数生*细胞，收集细胞24小时前换液一次。
　　
　　2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。
　　
　　3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。
　　
　　4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1.5毫升细胞悬液。
　　
　　5．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。
　　
　　细胞复苏方法
　　
　　1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。
　　
　　2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。
　　
　　3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。
　　
　　4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。
　　
　　5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。

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