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【细胞融合技术】以人鼠细胞杂交为例说明

时间:2025-3-21阅读:104
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  人、鼠细胞融合实验分三步进行∶

  首先用荧光染料标记抗体∶

  将小鼠的抗体与发绿色荧光的荧光素(fluorescin)结合,人的抗体与发红色荧光的罗丹明(rhodamine)结合;

  第二步是将小鼠细胞和人细胞在灭活的仙台病毒的诱导下进行融合;

  最后一步将标记的抗体加入到融合的人、鼠细胞中,让这些标记抗体同融合细胞膜上相应的抗原结合。

  开始,融合的细胞一半是红色,一半是绿色。在37℃下40分钟后,两种颜色的荧光在融合的杂z种细胞表面呈均匀分布,这说明抗原蛋白在膜平面内经扩散运动而重新分布。这种过程不需要ATP。如果将对照实验的融合细胞置于低温(1℃)下培育,则抗原蛋白基本停止运动。这一实验结果令人信服地证明了膜整合蛋白的侧向扩散运动。

  细胞融合关键

  1.技术上的误差常常导致融合的失败。例如,供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。

  2.融合试验最大的失败原因是污染,融合成功的关键是提供一个无毒无菌的操作环境。

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