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提取质粒DNA的质量和含量的鉴定方法

时间:2024-10-11阅读:356
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琼脂糖凝胶电泳是检测DNA质量的一种常用方法。‌ 它利用琼脂糖溶化再凝固后形成的固体基质,在电场作用下,带负电的DNA分子向阳极迁移,不同大小和构型的DNA分子迁移速度不同,从而分离出不同的区带。这种方法不仅可用于分离不同分子量的DNA,还能分离相对分子质量相同但构型不同的DNA分子‌。

琼脂糖凝胶电泳的原理基于DNA分子在电场中的迁移特性。DNA分子在高于等电点的溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。迁移速度取决于DNA分子的分子量和构型,分子量越大,迁移速度越慢。琼脂糖凝胶的浓度也会影响DNA的迁移率,不同浓度的凝胶可以分离不同大小范围的DNA片段‌。


琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒DNA

琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应,DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。

由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动。
不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50kb的DNA片段。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭(ethidum bromide ,EB),在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带,在电场中,pH8.0条件下,凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。

质粒DNA提取方法
1,碱裂解法
2,煮沸裂解
3,羟基磷灰石柱层析法
4,质粒DNA释放法
5,酸酚法等。

选择哪一种方法取决于以下几个因素
1,质粒的大小
2,大肠杆菌菌株
3,裂解后用于纯化的技术和实验要求


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