细胞裂解液各成分的作用与制备过程

细胞裂解液各成分的作用：

1、第一种50mmol/L Tris-HCl是缓冲液，保证细胞裂解时PH值也能稳定，Tris是一种有机碱。

2、第二种1.0 mmol/L EDTA是一种金属螯合剂。

3、第三种150 mmol/L NaCl是等渗体系电解质，用于协调细胞膜内外离子平衡。

4、第四种0.1% SDS是十二烷基硫酸钠，是一种表面活性剂和还原剂，有增溶作用。

制备细胞裂解液实验流程：

1. 收集yi蛋白酶消化的细胞并离心，用PBS清洗。

2. 用100μl 裂解缓冲液冰浴溶解沉淀10min（每500000个细胞20μl裂解缓冲液）。

3. 10000rpm，4°C离心10min，取上清转移至新管。

4. 用考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度。

5. 用裂解缓冲液将溶液浓度调到5mg/ml，每小瓶中放100μl，-80°C储存。

6. 按照1：1体积比混合2×样品缓冲液，煮沸5min后，室温放置5min。

7. 短时离心后点样电泳检测。

溶液准备：

裂解缓冲液：
0.15M NaCl, 5mM EDTA(pH 8.0), 1% Triton×100, 10mM Tris-Cl(pH 7.4); 使用前加 5mM DTT, 0.1mM PMSF 异丙醇和5mM ε-氨ji己酸

2×样品缓冲液：
130mM Tris-HCl（pH8.0）, 20%（v/v）甘油, 4.6%（w/v）SDS, 0.02%溴酚蓝, 2%DTT

PBS（pH7.4）：
10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, 50mM NaCl, 2.7mM KCl