血液琼脂培养基的制备实验方法

　　实验方法原理 血液培养基是一种含有脱纤维动物血（一般用兔血或羊血）的牛肉膏蛋白胨培养基，因此除培养细菌所需要的各种营养外，还能提供辅酶（如V因子），血红素（X因子)等特殊生长因子。 因此血液培养基常用于培养，分离和保存对营养要求苛刻的某些病原微生物。此外，这种培养基还可用来测定细菌的溶血作用。

　　实验材料 兔羊

　　试剂、试剂盒 牛肉膏蛋白胨培养基

　　仪器、耗材 三角瓶平皿注射器

　　实验步骤

　　一、血液培养基配方

　　二、器材

　　1.  培养基

　　牛肉膏蛋白胨培养基。

　　2. 仪器或其他用具

　　装有5~10粒玻璃珠的无菌三角瓶，无菌注射器，无血平皿等。

　　3.  动物

　　健康的兔或羊。

　　三、操作步骤

　　牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的制备（见实验牛肉膏蛋白胨培养基）。

　　2. 无菌脱纤维兔血（或羊血）的制备

　　用配备18号针头的注射器以无菌操作抽取全血（无菌采血操作见实验动物的注射），并立即注人装有无菌玻璃珠（约3 mm）的无菌三角瓶中，然后摇动三角瓶10 min左右，形成的纤维蛋白块会沉淀在玻璃珠上，把含血细胞和血清的上清液倾人无菌容器即得到脱纤维兔血（或羊血）置冰箱备用。

　　整个过程必须严格无菌操作，制备脱纤维血液时，应摇动足够时间以防凝固。

　　3. 将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化，待冷至45 ℃时，以无菌操作按10%加人无菌脱纤维兔血（或羊血）于培养基中，立即摇荡，以便血液和培养基充分混匀。

　　35-45℃时加入血液是为了保存其中某些不耐热的营养物质和保存血细胞的完整，以便于观察细菌的溶血作用。同时，在这种温度时琼脂不会凝固。

　　4.  迅速以无菌操作倒入无菌平皿中，使成血液琼脂平板。注意不要产生气泡。

　　5.  置37℃过夜，如无菌生长即可使用。