PCR 扩增产物出现多条带（杂带）解决方法

　　扩增产物出现多条带(杂带)

　　1) 引物用量偏大，引物的特异性不高。

　　应调换引物或降低引物的使用量。

　　2) 循环的次数过多。

　　适当增加模板的量，减少循环次数。

　　3) 酶的用量偏高或酶的质量不好。

　　应降低酶量或调换另一来源的酶。

　　4) 退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。

　　应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。

　　5) 样品处理不当。

　　6) Mg2+浓度偏高。

　　因适当调整Mg2+使用浓度。

　　7) 若为PCR试剂盒。

　　也可能时试剂盒本身质量有问题。

　　8) 复制提前终止。

　　使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。

　　9) 反应缓冲液未*融化或未充分混匀。

　　确保反应缓冲液融化*并*混匀。

　　10) 引物特异性差。

　　利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

　　11) 引物量过多。

　　减少反应体系中引物的用量。

　　12) 模板量过多。

　　质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。

　　13) 外源DNA污染。

　　确保操作的洁净。