上海远慕讲解：大鼠血管紧张素转化酶实验

大鼠血管紧张素转化酶 -2(ACE-2)ELISA 试剂盒

 ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 )

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗大鼠 ACE-2  单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 ACE-2 与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠 ACE-2 ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，zui后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值， ACE-2 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 ACE-2 浓度。

试剂盒组成 （ 2-8℃ 保存）

     准备试剂与收集血样

1.收集标本：血清、血浆（ EDTA 、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存 48 小时；更长时间须冷冻（ -20 ℃ 或 -70 ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.标准品液配制：使用前加入 1ml 蒸馏水 混匀，配成 250ng/ml 的溶液 。 设标准管 8 管，*管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在*管中加入 250ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出 500ul 弃去。第八管为空白对照。

3.10 ×标本稀释液用蒸馏水作 1:10 倍稀释（ 示例： 1ml 浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例： 1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序

1.加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.每孔中加入*抗体工作液 100ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 60 分钟。

4.洗板：同前。

5.每孔加酶标抗体工作液 100ul 。将反应板置 37 ℃ 30 分钟。

6.洗板：同前。

7.每孔加入底物工作液 100ul ，置 37 ℃ 暗处反应 15 分钟。

8.每孔加入 100ul 终止液混匀。

9.30 分钟内用酶标仪在 45 0nm 处测 吸光值。

结果计算与判断

1.所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。

2.以标准品 25 、 12.5 、 6.25 、 3.12 、 1.56 、 0.78 、 0.39 、 0 ng/ml 为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。

3.根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 ACE-2 含量 即可 。

试剂盒性能

   1. 灵敏度 ： zui小的 ACE-2  检测浓度小于 0.2ng/ml 。

2.特异性： 可同时检测重组或天然的大鼠 ACE-2 。 不与 大鼠其它细胞因子有交叉反应。

3.重复性：板内、板见变异系数均小于10 ％。

注意事项

           1.    以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

           2.    洗涤过程 很关键。洗涤不充分将导致度误差及 OD 值错误地升高。

    3.    板条开封后剩余板条要再封好，保持 板条干燥 。

   4.    本试剂盒宜置 4^o C 冰箱保存。

                   5.    本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！