ELISA试剂盒实验技巧！

ELISA试剂盒实验技巧！

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1. 标本及采集、贮运因素

   ① 严重溶血：以HRP为标记的ELISA测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性；

   ② 混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净

   ③ 如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；

   ④ 标本凝固不全，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；

   ⑤ 采血试管洗涤不*、反复使用易交叉污染

   ⑥ 塑料试管能吸附抗原物质 ，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。

    血清标本宜在新鲜时检测，严重溶血标本禁用。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合，使间接法的 试剂 本底加深。超过一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使 抗体 效价跌落，所以测 抗体 的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。

2. 之操作技术的影响

   ① 应保证清洁，整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。

   ② 合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

   ③ 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

   ④ 用洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干：还要防止针口有纤维蛋白或异物，这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。

   ⑤ 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。