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细胞培养常见问题

时间:2016-3-11阅读:1406
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    细胞培养常见问题,上海远慕生物技术人员详解如下:

    1、如何选用特殊细胞系培养基?

    培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。

    2、何时须更换培养基?

    视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。

    3、可否使用与原先培养条件不同之培养基?

    不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活。

    4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类?

    不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。

    5、何谓FBS,FCS,CS,HS?

    FBS(fetalbovineserum)和FCS(fetalcalfserum)是相同的意思,两者都是指胎牛血清,FCS乃错误的使用字眼,请不要再使用。CS(calfserum)则是指小牛血清。HS(horseserum)则是指马血清。

    6、培养细胞时应使用5%或10%CO2?或根本没有影响?

    一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10%CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5%CO2培养细胞。

    7、Hank''s平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用,不需要CO2培养箱。原因是什么?Hank''s平衡盐溶液(HBS)和Earle''s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别?

    HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles(2.2g/L)中比在Hanks(0.35g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡,以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2中,溶液会变碱,Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织,需要用Eagles液,。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,用Hanks液就可以了。

    8、细胞之接种密度为何?

    依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。

    9、悬浮性细胞应如何继代处理?

    一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,可将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。

    10、冷冻管应如何解冻?

    取出冷冻管后,须立即放入37°C水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。

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