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新霉素(geneticin, G418)又称遗传霉素,是一种氨基糖苷类抗生素, 是细胞稳定转染常用的抗性筛选试剂。G418能阻断蛋白质合成,对细菌、酵母、高等植物以及哺乳动物细胞均具有氨基糖苷类毒性,用于真核细胞从转座子Tn5和Tn601稳定转染新霉素(neo)抗性基因的选择和维持。经常用于基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面。
Leagene G418溶液经过滤除菌,一般工作浓度为50~1000ug/ml不等,然而不同类型的细胞需要根据实验确定jia浓度。在具有相对稳定基因组的细胞(如CHO细胞)中,一旦筛选出稳定细胞株后,无需加入G418继续培养。
主要成分:主要由G418、HEPES等组成,过滤除菌。
操作步骤(仅供参考):
1、 由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同批次的G418的活性液不同,所以在筛选之前,需要确定G418的jia筛选浓度,一般在50~1000μg/ml范围内进行筛选。
2、 将细胞制备成细胞悬液,并稀释到1000个/ml。
3、 加入不同量的G418 solution (20mg/ml),选择在10~14天内使细胞全部死亡的低G418浓度来进行下一步的筛选试验。
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