植物总酚检测试剂盒(比色法)使用说明书

植物总酚检测试剂盒(比色法)使用说明书

产品组成:

保质期:12个月有效；低温运输，按要求保存。

产品简介:

植物组织或果实中存在花青素、叶绿素、类胡萝卜素、类黄酮、酚类等物质，这些物质与果实等样品衰老过程密切相关，对其加工性能、存储、营养价值等都有重要影响，植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。

植物总酚检测试剂盒(比色法)检测原理是总酚(Total  Phenol)溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提总酚，根据提取液的吸收光谱特性，可利用分光光度计在特定波长(280nm)处测定其吸光度，通过与标准曲线比较，计算出总酚含量，主要用于植物组织或果实中总酚的提取以及定量检测总酚含量。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织

2、天平、称量纸、剪刀、研钵或匀浆器、离心管、离心机、滤纸或纱布

3、石英比色杯、紫外分光光度计

操作步骤(仅供参考):

1、总酚提取：

①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品0.25g，置于4℃预冷的研钵或匀浆器。

②加入4℃预冷的2~3ml  TPAssayBuffer，充分研磨或匀浆后转入10ml离心管，用TPAssayBuffer冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管，补加TPAssayBuffer至8ml。

③4℃避光静置20min，期间摇动2~3次，然后过滤至离心管中，也可用离心机8000r/min离心3min，滤液(上清液)即为总酚粗提液。

2.稀释总酚标准溶液:将总酚标准(1mg/ml)用TP  AssayBuffer稀释成总酚标准(50ug/ml)，取干净离心管或试管，按下表进行操作，依次稀释。

3、TP加样：按照下表设置空白管、对照管、测定管；如果样品中的总酚浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。

注意：如用较大的比色杯，可相应增加试剂量，其后计算公式中V1=加样时所用总酚粗提液的体积(ml)应相应发生变化。

4、TP测定：各管试剂加入光径1cm的石英比色杯中，在5~15min内，以空白管调零，用紫外分光光度计280nm处测定系列标准管、测定管的吸光度。

计算：

以1-6号管系列总酚标准浓度(5、10、  15、20、25、30μg/ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，进而计算出各测定孔总酚浓度(ug/ml)。

组织样品的总酚(ug/g)=C×VT×N/W

液体样品的总酚(ug/ml)=C×N

式中：C=根据标准曲线求得的测定管总酚浓度(ug/ml)

VT=总酚粗提液总体积(ml)=8

W=样品鲜重(g)

N=稀释倍数

注意事项：

1、为了避免总酚见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间。

2、取样量、试剂用量应根据总酚含量适当调整。

3、TPAssayBuffer应密闭保存，避免有效成分挥发。

4、测定时，石英比色皿上应加盖，防止挥发。

5、测定应及时，时间延长，总酚浓度高时，测定结果可能偏低。

6、植物总酚浓度在10~20ug/ml范围时，OD值基本稳定，超出范围时结果随时间有稍微变化。

7、如果没有紫外分光光度计，也可以使用全波长酶标仪测定。

8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。