大鼠粒细胞集落刺激因子（G-CSF）ELISA试剂盒操作步骤

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大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒操作步骤

　　【信息说明】

　　中文名：大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒

　　别名：大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA Kit

　　供应商：上海远慕

　　规格：48t/96t

　　保存：2~8℃

　　有效期：6个月

　　样本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

　　特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。

　　用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。

　　种属：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。

　　检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

　　【性能优点】

　　专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原(或抗体)，使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。

　　灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。

　　样品易保存：经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定，因此有利于样品的保存。

　　【操作步骤】

　　1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

　　2、弃去液体，甩干，每个孔中加入detection ab工作液 100μl(在使用前15分钟内配制)，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。

　　3、弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μl /每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。

　　4、每孔加hrp conjugate工作液(临用前15分钟内配制)100μl，加上覆膜，37℃温育1小时。

　　5、弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

　　6、每孔加底物溶液100μl，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右(根据实际显况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止)。

　　7、每孔加终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。

　　8、立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(od值)。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

　　9、实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。

　　【注意事项】

　　1、操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

　　2、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　3、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　4、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　5、底物请避光保存。

　　6、试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm

　　7、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

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