PEG1450溶液（50%,无菌） 操作方法

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PEG1450溶液(50%,无菌) 操作方法

【信息说明】

产品名称：PEG1450溶液(50%,无菌)

供应商：远慕生化试剂厂家

规格：10ml 5×10ml

分类：细胞培养

储存条件：4℃,6个月

用途：聚乙二醇可用作融合剂，以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞，诱导细胞杂交，同SigmaP7181。

注意事项：无菌溶液，由DPBS(pH7.4)和PEG1450或称聚乙烯醇1450组成,经过滤除菌。

【操作方法】

1、 如果变成胶冻状,可37~60℃水浴使其变成溶液。

2、单层贴壁细胞:将杂交前体细胞以相同数量(5×104/ml)接种，以适当的培养基培养细胞,待细胞贴壁扩展至汇合成片(80%汇合率)的密度；吸干培养液，加入 PEG1450溶液(50%,无菌)，轻轻转动1min使PEG1450溶液覆盖所有细胞。

3、静置1min：加入*MEM培养液以稀释PEG1450溶液，吸干净稀释的PEG1450溶液，再用5ml MEM培养液洗涤被PEG处理的细胞；吸干净洗液，加入 MEM培养液，37℃，5%CO2培养过夜。24~48h后先吸去培养液，加入胰酶消化液处理细胞，待细胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT选择培养剔除HPRT和TK缺陷细胞。

4、弃上清液：用补加1×HT和1×A的*培养液重新悬浮细胞；融合后进行异核体分析，杂交前体细胞在4~5天内发生死亡，对于大多数融合前体细胞而言，可见杂交细胞克隆。

5、悬浮细胞：将两种不同亲体的细胞各1ml(约为1×107)混匀，离心以沉淀杂交前体细胞，弃上清液，使之剩余约1ml，手指轻弹管底或手摇离心管使两种细胞混匀并重新悬浮；在离心管中加入1ml PEG1450溶液(50%,无菌)，置于37℃水浴，加入提前37℃预热的含10%胎牛血清的MEM培养液，使PEG1450稀释并停止作用。

6、离心：弃上清液,加入5ml*MEM培养液以稀释PEG1450溶液，吸干净稀释的PEG1450溶液；用5ml无血清MEM培养液，手摇离心管重悬细胞(不要破坏细胞)，1000g离心5min，弃上清液,重复1次该步骤。

7、加入含有胎牛血清的HAT选择培养基，混匀；将细胞悬液用培养液稀释至5×104/ml，接种于96孔板，37℃ 5%CO2孵育过夜24~48h后选出融合细胞。

【注意事项】

1、 应注意无菌操作，避免被微生物污染。

2、 PEG1450溶液较为粘稠时，可37~60℃水浴使其变成溶液。

3、 体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可做融合，但成功概率较大的是单层贴壁细胞。

4、 如需HAT选择系列产品，可选择Leagene A Media Supplement(50×)、HT MediaSupplement(50×)、HAT Media Supplement(50×)。

【服务承诺】

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