绵羊饥饿激素（GHRL）ELISA试剂盒操作步骤

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绵羊饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒操作步骤

【信息说明】

中文名：绵羊饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒

别名：绵羊饥饿激素(GHRL)ELISA Kit

供应商：上海乔羽

规格：48t/96t

保存：2-8℃

有效期：6个月

适用范围：本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床。

用途：用于测定人血清,血浆,组织及相关液体样本中的含量或活性。

特点：灵敏性高、特异性强、重复性好。

ELISA试剂盒种属：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等。

检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

【性能优点】

1、准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2、灵敏度：zui低检测浓度小于10 pg/ml。

3、特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4、重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

【样本处理】

1、血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心

2、血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心

3、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清

4、组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用

5、培养细胞：检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

【操作步骤】

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2、弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37℃,60分钟。

3、温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4、每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl，37℃，60分钟。

5、温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

6、依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。

7、依序每孔加终止溶液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8、用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

【注意事项】

1、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

2、试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

3、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

4、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

5、洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

6、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

7、加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

8、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

9、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

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