Hoechst33258染色液（1mg/ml）操作步骤

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中文名：Hoechst33258染色液(1mg/ml)

供应商：上海远慕

规格：1ml

分类：细胞染色

保存：—20℃,避光,12个月

用途：细胞凋亡检测，普通细胞核染色，常规的DNA染色。

说明：Hoechst33258染色中leagene公司推荐采用该试剂；Hoechst33258是一种荧光染料，可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低；染色染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测，可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

Hoechst33258染色液(1mg/ml)

Hoechst33258染色液(1mg/ml)操作步骤：

1、固定的组织细胞染色

a.对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂；随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33258染色；如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst33258染色。

b.对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33258工作液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积的工作液，混匀；室温放置3-5分钟。

c.吸除Hoechst33258染色液，用TBST，PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察；细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2、活细胞染色

a.根据实验具体要求，用无菌去离子水稀释到自己所需浓度，即为Hoechst33258染色工作液；细胞核染色时，一般推荐工作浓度为1～5μg/ml。

b.取96，24，6孔板培养细胞至合适状态；按96孔板加入100μl，24孔板加入500μl，6孔板加入1ml的比例，加入适当的Hoechst33258染色液，染液必须充分覆盖细胞。

c.在适宜于细胞培养的条件下培养。

d,轻轻吸除Hoechst33258染色液。

e.用无菌的PBS或生理盐水清洗2～3次。

f.进行荧光检测。

Hoechst33258染色液(1mg/ml)注意事项：

1、Leagene Hoechst33258染色液(1mg/ml)应稀释至合适的浓度后使用。

2、荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂；建议染色后尽量当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。

3、避免反复冻融，否则容易失效。

4、Hoechst33258对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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