葡聚糖凝胶G-75使用方法详细介绍

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中文名：葡聚糖凝胶G-75

中文别名：交联葡聚糖凝胶 G-75；交联右旋糖酐凝胶 G-75

英文名称：Sephadex G-75

供应商：上海远慕

PH：2~13

保存：RT

干颗粒直径： 40～120 μm

床体积毫升/克干分子筛：12～15ml/g

分子量分级范围：A.肽及球形蛋白质：3000～80000；B葡聚糖(线性分子)：1000～50000

性状：白色珠粒或粉末，属亲水性凝胶；性稳定，不溶于水、弱酸和碱溶液，遇强酸能使糖甘键分解。

适用范围：限于科研实验，不作临床。

葡聚糖凝胶G-75说明书

葡聚糖凝胶G-75化学性质：

葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀； G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同；葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

葡聚糖凝胶有不同的粒度；超细级的葡聚糖凝胶是用于需要*分辨率的柱色谱和薄层色谱；粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速；另外，粗级也可用于批量工艺。

化学稳定性:

葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)；它在水，盐溶液，有机溶剂，碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖昔键被水解；长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。

物理稳定性:

葡聚糖疑胶并不熔融，可以在湿态，中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃，30分钟而不影响它的色谱性质；干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化；葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。

葡聚糖凝胶G-75分离技巧:

1、分离时流速不可太快，切切不可心急，所谓欲速则不达;接馏分时可开全速，节省时间。

2、柱子尽可能长，葡聚糖凝胶柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。

3、馏分一定要接的细，可1/10，或1/20 个保留体积接成一馏分。

4、洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。

5、鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质

6、葡聚糖凝胶对黄酮类成分的分离效果，方法很成型，有大量文献参考。

7、醇替换出来，待用；暂时不用试可以水洗→含水醇洗(醇的浓度逐步递增)→醇洗，zui后泡在醇中贮于磨口瓶中备用；如长期不用时，可在以上处理基础上，减压抽干，再用少量乙迷洗净抽干，室温充分挥散至无醚味后，60～80°C干燥后保存。

葡聚糖凝胶G-75使用方法：

1、乙醇浸泡:

在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇，滤干；

2、无盐水浸泡:

室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的*溶胀；

3、 盐酸浸泡:

在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性；

4、将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；

5、上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)；

6、凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5: 1 即可；

7、洗脱方法:

可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以*分离纯化；

8、在位清洗(CIP)

凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白；方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向清洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

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